Заҳри мор дорои ферментҳое мебошад, ки пайвандҳои эфири карбоксилро гидролиз мекунанд.Субстратҳои гидролиз фосфолипидҳо, ацетилхолин ва ацетат ароматӣ мебошанд.Ин ферментҳо се намудро дар бар мегиранд: фосфолипаза, ацетилхолинестераза ва эстерази ароматӣ.Эстераза аргинин дар заҳри мор инчунин метавонад аргинин ё лизини синтетикиро гидролиз кунад, аммо он асосан пайвандҳои пептидҳои сафедаро дар табиат гидролиз мекунад, аз ин рӯ ба протеаза тааллуқ дорад.Ферментҳои дар ин ҷо муҳокимашуда танҳо ба субстратҳои эфирӣ амал мекунанд ва наметавонанд ба ягон пайванди пептидӣ таъсир расонанд.Дар байни ин ферментхо вазифахои биологии ацетилхолинэстераза ва фосфолипаза мухимтар буда, пурра омухта шудаанд.Баъзе заҳрҳои мор дорои фаъолияти пурқуввати эстеразаи хушбӯй мебошанд, ки метавонанд эфири р-нитрофенил этил, а - ё Р-нафтален ацетат ва эфири этилиро гидролиз кунанд.Ҳанӯз маълум нест, ки ин фаъолият аз ҷониби ферментҳои мустақил ё таъсири маълуми карбоксилэстераза тавлид мешавад, бигзор аҳамияти биологии он расад.Вақте ки заҳри Agkistrodon halys Japonicus бо эфири п-нитрофенил этилӣ ва эфири этилидолӣ реаксия карда шуд, гидролизатҳои п-нитрофенол ва индол фенол ёфт нашуданд;Баръакс, агар ин эфирҳо бо заҳри мори кобра Чжоушан ва заҳри мори Bungarus multicinctus реаксия кунанд, онҳо зуд гидролиз мешаванд.Маълум аст, ки ин заҳрҳои кобра дорои фаъолияти пурқуввати холинэстераза мебошанд, ки метавонанд барои гидролизи субстратҳои дар боло зикршуда масъул бошанд.Дар асл, Маклин ва дигарон.(1971) гузориш додааст, ки бисёре аз заҳрҳои мор, ки ба оилаи Кобра тааллуқ доранд, метавонанд эфири этилии индол, эфири этили нафталин ва эфири бутил нафталинро гидролиз кунанд.Ин заҳрҳои мор аз: кобра, кобра гардани сиёҳ, кобра лаби сиёҳ, кобра тиллоӣ, кобра мисрӣ, кобра шоҳ, мамба кобра тиллоӣ, мамба сиёҳ ва мамба лабони сафед (Д. ав то ҳол мори ромболаи шарқиро медонад.
Заҳри мор метавонад эфири метил индол этилиро гидролиз кунад, ки субстрат барои муайян кардани фаъолияти холинэстераза дар хуноба мебошад, аммо ин заҳри мор фаъолияти холинэстеразаро нишон намедиҳад.Ин нишон медиҳад, ки дар заҳри кобра эстеразаи номаълум мавҷуд аст, ки аз холинестераза фарқ мекунад.Барои фаҳмидани табиати ин фермент, кори минбаъдаи ҷудокунӣ лозим аст.
1, фосфолипаза А2
(I) Барраси
Фосфолипаза як ферментест, ки метавонад фосфати глицерилро гидролиз кунад.Дар табиат 5 намуди фосфолипаза мавҷуданд, яъне фосфолипаза А2 ва фосфолипаза
А., фосфолипаза В, фосфолипаза С ва фосфолипаза D. Заҳри мор асосан фосфолипаза А2 (PLA2) дорад, чанд заҳри мор фосфолипаза B ва фосфолипазаҳои дигар асосан дар бофтаҳои ҳайвонот ва бактерияҳо мавҷуданд.Расми 3-11-4 макони амали ин фосфолипазаҳоро дар гидролизи субстрат нишон медиҳад.
Дар байни фосфолипазаҳо PLA2 бештар омӯхта шудааст.Он метавонад ферменти аз ҳама омӯхташуда дар заҳри мор бошад.Субстрати он пайванди эфирӣ дар мавқеи дуюми Sn-3-глицерофосфат мебошад.Ин фермент дар заҳри мор, заҳри занбӯри асал, заҳри каждум ва бофтаҳои ҳайвонот ба таври васеъ мавҷуд аст ва PLA2 дар чор заҳри мори оилавӣ фаровон аст.Азбаски ин фермент ҳуҷайраҳои сурхи хунро мешиканад ва боиси гемолиз мегардад, онро "гемолизин" низ меноманд.Баъзе одамон инчунин PLA2-ро лецитиназаи гемолитикӣ меноманд.
Людике бори аввал фаҳмид, ки заҳри мор тавассути ферментҳо ба лецитин таъсир карда, пайвастагии гемолитикиро ба вуҷуд меорад.Баъдтар, Делезен ва дигарон.исбот кард, ки хангоми ба зардоби асп ё зардии асп таъсир кардани захри кобра моддаи гемолитикй ба вучуд меояд.Ҳоло маълум аст, ки PLA2 метавонад бевосита ба фосфолипидҳои мембранаи эритроситҳо таъсир карда, сохтори мембранаи эритроситро вайрон кунад ва боиси гемолизи мустақим гардад;Он инчунин метавонад дар хуноба ё иловашудаи лецитин барои тавлиди лецитини гемолитикӣ амал кунад, ки ба ҳуҷайраҳои сурхи хун барои тавлиди гемолизи ғайримустақим амал мекунад.Гарчанде ки PLA2 дар чор оилаи заҳри мор фаровон аст, мазмуни ферментҳо дар заҳри морҳои гуногун каме фарқ мекунад.Мори гулӯла (C
Заҳри мор танҳо фаъолияти сусти PLA2-ро нишон дод.Ҷадвали 3-11-11 муқоисаи фаъолияти PLA2-и 10 заҳри асосии морҳои заҳрдорро дар Чин нишон медиҳад.
Ҷадвали 3-11-11 Муқоисаи фаъолияти фосфолипаза VIII 10 заҳри мор дар Чин
Заҳри мор
Равғани фарбеҳ
кислотаи алифатӣ,
Цюмол/мг)
Фаъолияти гемолитикӣ CHU50/^ г * мл)
Заҳри мор
Кислотаҳои равғаниро озод кунед
(^раол/мг)
Фаъолияти гемолитикӣ "(HU50/ftg * 1111)
Наҷанаҷа атра
9. 62
ёздаҳ
Микрацефалӣ
панҷ нуқта як сифр
калиспаллас
8. 68
ду хазору хаштсад
gracilis
V, шадид
7. 56
* * #
Офиофаг Ханна
се хол ҳашт ду
саду чил
Bnugarus fasctatus
7,56
дусаду ҳаштод
B. multicinctus
як хол нӯҳ шаш
дусаду ҳаштод
Випер ва руссели
ҳафт нуқтаи сифр се
T, mucrosquamatus
як хол ҳашт панҷ
Сиаменсис
T. stejnegeri
0. 97
（2） Ҷудокунӣ ва поксозӣ
Мазмуни PLA2 дар заҳри мор калон аст ва он ба гармӣ, кислотаҳо, сілтҳо ва денатуратҳо устувор аст, то тоза ва ҷудо кардани PLA2 осон бошад.Усули маъмул ин аст, ки аввал филтратсияи гелро дар заҳри хом, пас хроматографияи мубодилаи ионҳо анҷом диҳед ва қадами ояндаро такрор кардан мумкин аст.Бояд қайд кард, ки яхкунонии PLA2 пас аз хроматографияи мубодилаи ион набояд боиси ҷамъшавӣ шавад, зеро раванди яхкунӣ аксар вақт қувваи иониро дар система зиёд мекунад, ки омили муҳими ҷамъшавии PLA2 мебошад.Илова ба усулҳои дар боло зикршуда, усулҳои зерин низ қабул карда шудаанд: ① Уэллс ва дигарон.② Аналоги субстрати PLA2 ҳамчун лиганд барои хроматографияи наздикӣ истифода шудааст.Ин лиганд метавонад ба PLA2 дар заҳри мор бо Ca2 + пайваст шавад.EDTA асосан ҳамчун элюент истифода мешавад.Пас аз хориҷ кардани Ca2+, наздикии PLA2 ва лиганд кам мешавад ва онро аз лиганд ҷудо кардан мумкин аст.Дигарон 30% маҳлули органикӣ ё 6мол/л мочевинаро ҳамчун элюент истифода мебаранд.③ Хроматографияи гидрофобӣ бо PheiilSephar0SeCL-4B барои нест кардани микроэлементҳои PLA2 дар кардиотоксин анҷом дода шуд.④ Антиденои PLA2 ҳамчун лиганд барои анҷом додани хроматографияи наздикӣ дар PLA2 истифода шуд.
То кунун миқдори зиёди заҳри мор PLAZ тоза карда шудааст.Ту ва дигарон.(1977) номбар шудааст, ки PLA2 аз заҳри мор то соли 1975 тоза карда шудааст. Дар солҳои охир ҳар сол шумораи зиёди мақолаҳо дар бораи ҷудокунӣ ва тозакунии PLA2 гузориш дода мешаванд.Дар ин ҷо, мо ба ҷудо кардан ва тоза кардани PLA аз ҷониби олимони чинӣ тамаркуз мекунем.
Чен Юанконг ва дигарон.(1981) се намуди PLA2-ро аз заҳри Agkistrodon halys Pallas дар Чжэцзян ҷудо кард, ки онҳоро аз рӯи нуқтаҳои изоэлектрикӣ ба PLA2 кислотаӣ, нейтралӣ ва сілтӣ тақсим кардан мумкин аст.Мувофиқи заҳролудшавӣ, нейтралии PLA2 заҳролудтар аст, ки ҳамчун нейротоксин пресинаптикии Agkistrodotoxin муайян карда шудааст.Алкалинии PLA2 камтар заҳролуд аст ва PLA2 кислотаи қариб заҳролуд надорад.Ву Сянфу ва дигарон.(1984) хусусиятҳои се PLA2, аз ҷумла вазни молекулавӣ, таркиби аминокислотаҳо, N-терминал, нуқтаи изоэлектрикӣ, устувории ҳароратӣ, фаъолнокии ферментҳо, заҳролудшавӣ ва фаъолияти гемолитикиро муқоиса кардааст.Натиҷаҳо нишон доданд, ки онҳо вазни молекулавӣ ва устувории гармӣ доранд, аммо дар дигар ҷанбаҳо фарқиятҳои назаррас доранд.Дар ҷанбаи фаъолнокии ферментҳо, фаъолнокии ферментҳои кислота нисбат ба ферментҳои сілтӣ баландтар буд;Таъсири гемолитикии ферментҳои сілтӣ ба ҳуҷайраҳои сурхи хуни каламуш сахттарин буд, пас аз он ферменти нейтралӣ буд ва ферментҳои кислота базӯр гемолиз мешуданд.Аз ин рӯ, тахмин мекунанд, ки таъсири гемолитикии PLAZ бо заряди молекулаи PLA2 алоқаманд аст.Чжан Цингкан ва дигарон.(1981) кристаллхои агкистродотоксинро сохтанд.Ту Гуанлян ва дигарон.(1983) гузориш дод, ки PLA-и заҳролуд бо нуқтаи изоэлектрикии 7.6 аз заҳри Vipera rotundus аз Фуҷиан ҷудо ва тоза карда шуд ва хосиятҳои физикӣ ва химиявии он, таркиби аминокислотаҳо ва пайдарпаии 22 боқимондаи кислотаи аминокислотаҳо дар N. -терминал муайян карда шуданд.Ли Юэшэн ва дигарон.(1985) PLA2-и дигарро аз заҳри Viper rotundus дар Фуҷиан ҷудо ва тоза кард.Зервоҳиди PLA2 * 13 800, нуқтаи изоэлектрикӣ 10,4 ва фаъолияти мушаххас 35/xnioI/miri mg. Бо лецитин ҳамчун субстрат, рН оптималии фермент 8,0 ва ҳарорати оптималии 65 ° C аст. LD5 ба мушҳо ба дохили вена ворид карда мешавад.Он 0,5 ± 0,12 мг / кг аст.Ин фермент таъсири намоёни антикоагулянтӣ ва гемолитикӣ дорад.Молекулаи заҳрноки PLA2 аз 123 боқимондаи 18 намуди аминокислотаҳо иборат аст.Молекула аз систеин (14), кислотаи аспартикӣ (14) ва глицин (12) бой аст, аммо танҳо як метионин дорад ва N-терминали он пасмондаи серин аст.Дар муқоиса бо PLA2, ки аз ҷониби Тугуанг ҷудо карда шудааст, вазни молекулавӣ ва шумораи боқимондаҳои кислотаи аминокислотаҳои ду изофермент хеле монанданд ва таркиби аминокислотаҳо низ хеле монанданд, аммо шумораи пасмондаҳои кислотаи аспартикӣ ва пролин то андозае фарқ мекунанд.Заҳри мори шоҳ кобра Гуанси дорои бойи PLA2 мебошад.Шу Юян ва дигарон.(1989) PLA2-ро аз заҳр ҷудо кардааст, ки фаъолияти хоси он аз заҳри аслӣ 3,6 маротиба зиёдтар, вазни молекулавӣ 13000, таркиби 122 боқимондаи кислотаи аминокислотаҳо, нуқтаи изоэлектрикӣ 8,9 ва устувории хуби гармӣ дорад.Аз мушоҳидаи микроскопи электронии таъсири асосии PLA2 ба ҳуҷайраҳои сурхи хун маълум мешавад, ки он ба мембранаи ҳуҷайраҳои сурхи хуни инсон таъсири равшан дорад, аммо ба ҳуҷайраҳои сурхи хуни буз таъсири возеҳ надорад.Ин PLA2 ба суръати электрофорезии ҳуҷайраҳои сурхи хун дар одамон, бузҳо, харгӯшҳо ва хукҳои гвинея таъсири равшан дорад.Чен ва дигарон.Ин фермент метавонад ҷамъшавии тромбоцитҳоро, ки аз ҷониби ADP, коллаген ва кислотаи арахидонии натрий ба вуҷуд омадааст, боздорад.Вақте ки консентратсияи PLA2 10/xg/ml~lOOjug/ml аст, агрегатсияи тромбоцитҳо комилан монеъ мешавад.Агар тромбоцитҳои шуста ҳамчун мавод истифода мешуданд, PLA2 наметавонад агрегатсияро дар консентратсияи 20 мг/мл боздорад.Аспирин як ингибитори циклоксигеназа мебошад, ки метавонад таъсири PLA2-ро ба тромбоцитҳо боздорад.PLA2 метавонад ҷамъшавии тромбоцитҳоро тавассути гидролиз кардани кислотаи арахидонӣ барои синтез кардани тромбоксан А2 боздорад.Конформатсияи маҳлули PLA2, ки аз ҷониби заҳри Agkistrodon halys Pallas дар музофоти Чжэцзян истеҳсол шудааст, тавассути дихроизми даврашакл, флуорессенсия ва абсорбсияи ултрабунафш омӯхта шуд.Натиҷаҳои таҷрибавӣ нишон доданд, ки конформатсияи асосии занҷири ин фермент ба ҳамон намуди ферментҳои дигар намудҳо ва наслҳо монанд аст, конформатсияи скелет ба гармии хуб муқовимат дошт ва тағироти сохторӣ дар муҳити кислота баръакс буд.Омезиши фаъолкунандаи Са2+ ва фермент ба муҳити боқимондаҳои триптофан таъсир намерасонад, ингибитори Zn2+ бошад, баръакс.Тарзи таъсиррасонии арзиши рН-и маҳлул ба фаъолияти ферментҳо аз реагентҳои дар боло зикршуда фарқ мекунад.
Дар ҷараёни тозакунии PLA2 аз заҳри мор як падидаи возеҳ ин аст, ки заҳри мор ду ё зиёда қуллаи элюсияи PLA2 дорад.Ин ходисаро ба таври зайл шарх додан мумкин аст: ① аз сабаби мавчудияти изозимхо;② Як намуди PLA2 ба омехтаҳои гуногуни PLA2 бо вазнҳои гуногуни молекулавӣ полимеризатсия карда мешавад, ки аксари онҳо дар ҳудуди 9 000 ~ 40 000 мебошанд;③ Омезиши PLA2 ва дигар ҷузъҳои заҳри мор PLA2-ро мушкил мекунад;④ Азбаски пайванди амидӣ дар PLA2 гидролиз мешавад, заряд тағир меёбад.① Ва ② маъмуланд, ба истиснои чанд истисно, ба монанди PLA2 дар заҳри мори CrWa/w
Ду ҳолат вуҷуд дорад: ① ва ②.Ҳолати сеюм дар PLA2 дар заҳри морҳои зерин пайдо шудааст: Oxyranus scutellatus, Parademansia microlepidota, Bothrops a ^>er, мори фаластинӣ, мори қум ва мори даҳшатангез km。.
Натиҷаи ҳолати ④ суръати муҳоҷирати PLA2-ро ҳангоми электрофорез тағир медиҳад, аммо таркиби аминокислотаҳо тағир намеёбад.Пептидҳоро тавассути гидролиз шикастан мумкин аст, аммо умуман онҳо то ҳол бо пайвандҳои дисульфидӣ пайваст мешаванд.Заҳри мори чоҳи шарқӣ дорои ду шакли PLA2 мебошад, ки мутаносибан навъи a ва навъи p PLA2 ном доранд.Фарқи байни ин ду намуди PLA2 танҳо як кислотаи аминокислотаҳо аст, яъне глутамин дар як молекулаи PLA2 бо кислотаи глутаминӣ дар молекулаи дигари PLA2 иваз карда мешавад.Гарчанде ки сабаби дақиқи ин фарқият маълум нест, ба таври умум чунин мешуморанд, ки он ба дезаминизатсияи PLA2 алоқаманд аст.Агар PLA2 дар заҳри мори фаластинӣ бо заҳри хом гарм нигоҳ дошта шавад, гурӯҳҳои ниҳоии молекулаҳои ферментҳои он аз пештара зиёдтар мешаванд.Аз C PLA2, ки аз заҳри мор ҷудо карда шудааст, ду N-терминали гуногун дорад ва вазни молекулавии он 30000 аст. Ин падида метавонад аз сабаби димери асимметрии PLA2 бошад, ки ба димери симметрии PLA2 дар заҳри мори алмосбеки шарқӣ монанд аст. ва мори алмоси ғарбӣ.Кобраи осиёӣ аз зернамудҳои зиёде иборат аст, ки баъзеи онҳо дар тасниф чандон мушаххас нестанд.Масалан, он чизе, ки қаблан зернамудҳои Кобра берунии Каспий номида мешуданд, ҳоло эътироф карда мешаванд
Он бояд ба Кобра берунии Бахри Каспий мансуб бошад.Азбаски зернамудҳои зиёде мавҷуданд ва онҳо бо ҳам омехта шудаанд, таркиби заҳри мор аз сабаби сарчашмаҳои гуногун хеле фарқ мекунад ва мундариҷаи изозимҳои PLA2 низ баланд аст.Масалан, заҳри кобра
Дар заҳри зернамудҳои кобра Каспий камаш 9 намуди изозимҳои PLA2-и r ^ ll ва 7 намуди изозимҳои PLA2 пайдо шуданд.Дуркин ва дигарон.(1981) мазмуни PLA2 ва шумораи изозимҳоро дар заҳри морҳои гуногун, аз ҷумла 18 заҳри кобра, 3 заҳри мамба, 5 заҳри мор, 16 заҳри мор ва 3 заҳри мори баҳр омӯхтааст.Умуман, фаъолияти PLA2-и заҳри кобра баланд буда, изозимҳои зиёд дорад.Фаъолияти PLA2 ва изозимҳои заҳри морҳо миёна мебошанд.Фаъолияти PLA2-и заҳри мамба ва заҳри мори мор хеле паст аст ё фаъолияти PLA2 надорад.Фаъолияти PLA2-и заҳри морҳои баҳрӣ низ паст аст.
Дар солҳои охир гузориш дода нашудааст, ки PLA2 дар заҳри мор дар шакли димери фаъол мавҷуд аст, ба монанди мори ромбофораи шарқӣ (Заҳри мори C. дорои навъи а ва навъи P PLA2 мебошад, ки ҳарду аз ду зербахши якхела иборатанд. , ва танҳо димераза дорад
Фаъолият.Шен ва дигарон.инчунин пешниҳод кард, ки танҳо димери PLA2-и заҳри мор шакли фаъоли фермент мебошад.Омӯзиши сохтори фазоӣ инчунин собит мекунад, ки PLA2 мори алмосбарги ғарбӣ дар шакли димер мавҷуд аст.Мушкилоти моҳихӯр
Ду намуди PLA ^ Ei ва E2-и заҳри мор мавҷуд аст, ки дар онҳо 仏 дар шакли димер мавҷуд аст, димер фаъол ва мономери ҷудошудаи он ғайрифаъол аст.Лу Инхуа ва дигарон.(1980) минбаъд хосиятҳои физикию химиявӣ ва кинетикаи реаксияҳои Э.Ҷайянти ва дигаронро омӯхтанд.(1989) як PLA2 (VRVPL-V)-и асосиро аз заҳри мор ҷудо кард.Вазни молекулавии мономери PLA2 10000 аст, ки таъсири марговар, антикоагулянтӣ ва варам дорад.Фермент метавонад дар шароити РН 4,8 полимерҳои дорои вазни молекулавии гуногунро полимеризатсия кунад ва дараҷаи полимеризатсия ва вазни молекулавии полимерҳо бо баланд шудани ҳарорат зиёд мешавад.Вазни молекулавии полимере, ки дар ҳарорати 96 ° C тавлид мешавад, 53 100 аст ва фаъолияти PLA2-и ин полимер ду маротиба зиёд мешавад.
Вақти фиристодан: Ноябр-18-2022